مواد و روشها و انتخاب دام
1) آماده سازی تعداد 2000 اسلاید جهت تهیه گسترش خون از رگهای جداری و رگهای عمقی و بررسی ریزبینی
2) آماده سازی سوزنهای پونکسیون جهت تهیه بیوپسی از غدد لنفی سطحی
( بخصوص پیش کتفی) تهیه گسترش بمنظور بررسی ریزبینی
3) تهیه لوله های ونوجکت(Veno ject ) حدود 2000 عدد جهت گرفتن خون و تهیه سرم و نگهداری آنها در منهای بیست در جه تا موقع انجام تست های سرمی( تست الیزا)
4) تهیه آنتی ژن لیوفیلیزه وآنتی ژن سونیکه
1-4 روش تهیه آنتی ژن لیوفیلیزه جهت انجام تست تیلرین
سلولهای میلوئید آلوده به شیزونت تیلریاآنولاتا (Schizont Infected myeloid cells) رااز پاساژ های پائین سویه های جداشده تهیه نموده و سپس سلولهای تهیه شده را در دور rpm 1600با محلول PBS دوبار شستشو داده سپس برمبنای کنسانتره سلولی را تهیه نموده و در شیشه های مخصوص لیوفیلیزه 4 میلی لیتری و 8 میلی لیتری هر کدام یک میلی لینر تقسیم و سپس با دستگاه لیوفیلیزه آنها را لیوفیلیزه نموده و تا موقع مصرف در نگهداری می گردند. در موقع مصرف به هر شیشه یک میلی لیتر آب دوبار تقطیر شده استریل اضافه نموده و پس از تکان دادن بعنوان آنتی ژن از آن استفاده می شود .لازم به یادآوری است که میزان سلول در کنسانتره باید باندازه ای باشد که غلظت پروتئین مورد لزوم برای تزریق بر مبنای در نظر گرفته می شود.
2-4 روش تهیه آنتی ژن به روش سونیکاسیون جهت انجام تست تیلرین
کنسانتره سلولهای میلوئید آلوده به شیزونت تیلریاآنولاتا همانند روش لیوفیلیزه تهیه نموده و تعداد سلول را در هر میلی لیتر به میرسانیم و پس از دو بار شستشو با PBS در دور 1600 در دقیقه با دستگاه سونیکاتور به برای مدت 5 دقیقه سونیکه نموده و در g 10000 به مدت ده دقیقه سانتریفوژ شده و به مدت سه بار با PBS شستشو داده می شود.
و مایع روئی به عنوان آنتی ژن درنظر گرفته می شود سپس توتال پروتئین آنتی ژن تهیه شده بر مبنای بدست آورده و آن را تا موقع مصرف در چهار درجه سانتی گراد نگهداری مینمائیم.


انتخاب دام جهت بررسی های آزمایشگاهی
در طی سالهای 84-83 جمعاً چهار رأس گوساله هلندی بین 5-4 ماه از دامداریهایی که تیلریوز در سال های گذشته نداشته انتخاب شدند و در اصطبل فاقد کنه(Tick free stable ) نگهداری شدند. گوساله ها مدت یک ما ه مورد بررسی های ضروری قرار گرفتند از عدم آلودگی آنها اطمینان حاصل شد و سپس جهت بررسی طرح تداوم ایمنی مورد استفاده قرار گرفتند.

روش تهیه آنتی ژن تیلر یا آنولاتا به روش هموژنیزه با دستگاه (Homogenizer)
1) پاساژ سلول های میلوئید شیزونت دار تیلریاآنولاتا در 10 ساعت به حجم تقریبی هر کدام 150ml (Kachani1992 )
2) جمع آوری سلولها در شروع مرحله ایستا(Stationary )
3) سانتریفوژ نمودن و حذف محیط کشت توسط سه بار شستشو با PBS
4) ذوب و منجمدنمودن سلولها در و برای دوبار
5) هموژنیزه کردن سلولها د رسه سیکل 10 دقیقه در دور( 260rpm )
6) دوبار ذوب و انجماد نمودن مجدد
7) سانتریفوژ در دو نوبت در دور 2000g به مدت 30 دقیقه
8) استفاده از مایع روئی بعنوان آنتی ژن
9) پروتئین سنجی اندازه گیری پروتئین، تنظیم آنتی ژن بر مبنای غلظت توتال پروتئین
انتخاب دام جهت بررسی های صحرائی
د رتاریخ 31/6/83 و 7/7/83 طبق ضوابط ذیل جمعا 92 رأس از هفت گاوداری با نظر متخصص اپیدمیولوژیی انتخاب گردید. ضوابط در نظر گرفته شده جهت انتخاب دامهای تحت بررسی عبارت بودند از:
1) عاری بودن دامها از الودگی های تک یاخته ای
2) مناسب بودن وضع عمومی دامها با اشتهای خوب و عدم لاغری
3) عدم آلودگی به بیماری های باکتریائی ، ویروسی و قارچی
4) عدم آلودگی به انگلهای درونی
5) مایه کوبی مرتب بر علیه بیماریهای باکتریایی و ویروسی( شاربن، پاسترولوز، طاعون، تب برفکی و شاربن عالمتی. در اسفند ماه 1384 کلیه دامهای گروه اول واکسینه شده گروههای دوم و سوم واکسینه نشده اند.

دفعات مراجعه به شبکه دامپزشکی بوئین زهرا
و گاوداریهای انتخاب شده در ناحیه مزبور
از شهریور ماه 1384 لغایت اسفند ماه 1384
جدول شمار 1
ردیف تاریخ مراجعه انتخاب دام و شماره زنی مایه کوبی تهیه گسترش خون تهیه سرم تست تیلرین وضعیت عمومی دام
1 31/6/83 + - - - - مطلوب +
2 7/7/83
7/9/83
7/11/83 + - - - - مطلوب +
3 11/12/83 - + + + - مطلوب +
4 17/12/83 - + + + - مطلوب +
5 31/2/84 - - + + + مطلوب +
6 1/3/84 - - + + + مطلوب +
7 3/3/84 - - + - + مطلوب +
8 4/3/84
4/4/84
7/4/84 - - + + + مطلوب +
9 3/7/84 - + + مطلوب +
10 10/7/84 - + + مطلوب +
11 24/7/84
11/1084
16/11/84 صرفاً بحث با مسئولین شبکه دامپزشکی بوئین زهرا، مسئولین درمانگاههای خوصوصی اداره کل دامپزشکی جهت اجرا طرح تداوم ایمنی تیلریوز گاوی

در تاریخ 31/2/84 از کلیه دامهای گاوداری اصغر خراشانی که قبلاً مایه کوبی بر ضد تیلریوز شده تست لوزبر تست تیلرین با آنتی ژن بیوفیلیزه و آنتی ژن سونیک تیلر یا آنکوتا اتنجام گردید به منظور انجام تست الیزا خون گیری انجام و گسترش خونی نیتر از کلیه دامها تهیه گردید.( تعداد داام تست بررسی در این گاوداری برای 24 رأس می باشد)
- در تاریخ 31/2/84 ازکلیه دامهای گاوداری، رسول خراسانی که قبلاً مایه کوبی بر ضد تیلریور شده بودند تست تیلیرین بااستفاده از آنتی ژن لیوفیلیزه و آنتی ژن سونیکه تیلریا یا آنولاتا انجام گردید. بمنظور انجام تست خون گیری انجام شد و گسترش خون نیز تهیه گردید.( تعداد دام تحت بررسی در این گاوداری برابر 24 رأس می باشد)
- در تاریخ 1/3/84 از کلیه دامهای گاوداری اباصلت رضائی که قبلاً برضد تیلریوز مایه کوبی شده بودند تست تیلرین با استفاده از آنتی ژن لیونیلیزه و آنتی ژن سونیکه تیلر یا آنولاتا انجام گردید و بمنظور انجام تست الیزا(ELISA ) خون گیری انجام شده و گسترش خون نیز تهیه گردید( تعداد دام تحت بررسی در این گاوداری برابر 27 رأس می باشد.
- در تاریخ 1/3/84 از کلیه دامهای گاوداری موسی رضائی که قبلاً بر ضد تیلریوز مایه کوبی شده بودند تست تیلرین با استفاده از آنتی ژن بیوفیلیزه و آنتی ژن سونیکه تیلر یا آنولاتا انجام گردید و بمنظور انجام تست الیزا(ELISA ) خون گیری انجام شد و گسترش خون نیز تهیه گردید( تعداد دام تحت بررسی در این گاوداری برابر 20 رأس می باشد)
- در تاریخ 4/4/84 از کلیه دامهای گاوداری حاج رضا زرندی تست تیلرین با استفاده از آنتی ژن بیوفیلیزه و آنتی ژن سونیکه تیلر یا آنولاتا انجام شد و خون گیری جهت انجام تست الیزا انجام و گسترش خون نیز تهیه گردید.
( تعداد دام تحت بررسی در این گاوداری برابر 9 رأس می باشد)
- در تاریخ 4/4/84 از کلیه دامهای گاوداری ناصر جباری که قبلاً بر ضد تیلریوز مایه کوبی شده بودند تست تیلرین با استفاده از آنتی ژن بیونیلیزه تیلر یا آنولاتا انجام شد و جهت تست الیزا خون گیری انجام گردید و ضمناً گسترش خون نیز تهیه گردید( تعداد دام تحت بررسی در این گاوداری برابر 5 رأس می باشد)
- در تاریخ 4/484 از کلیه دامهای گاوداری حاج اکبر زرندی که قبلا ً بر ضد تیلریوز مایه کوبی شده بودند تست تیلرین با استفاده از آنتی ژن بیوفیلیزه تیلر یا آنولاتا انجام شده و جهت تست الایزا خون گیری انجام گردید و ضمناً گسترش خون نیز تهیه گردید( تعداد دام تحت بررسی در این گاوداری برابر 8 رأس بوده است)
بررسی های انجام شده در 9 جدول ( جداول 9-2) در صفحات ارائه شده است.

جدول شماره 22
3/7/84 گاوداری اباصلت رضایی بازدید کنترل دامهای تحت بررسی
ردیف شماره دام وضعیت دام خون گیری برای تهیه سرم گسترش خون
1 324 مطلوب آبستنی 8 ماهه + +
2 326 مطلوب + +
3 327 مطلوب + +
4 328 مطلوب آبستنی چهار ماهه + +
5 329 مطلوب + +
6 330 مطلوب + +
7 333 مطلوب + +
8 334 مطلوب آبستنی 8 ماهه + +
9 335 مطلوب + +
10 337 مطلوب + +
11 338 مطلوب + +
12 342 مطلوب + +
13 343 مطلوب + +
14 344 مطلوب + +
15 345 مطلوب + +
16 346 مطلوب + +
17 347 مطلوب + +
18 348 مطلوب + +
19 349 مطلوب + +
20 351 مطلوب + +
21 352 مطلوب + +
22 353 مطلوب + +
23 354 مطلوب + +
24 356 مطلوب + +
25 357 مطلوب + +
جدول شماره 12
تاریخ 3/7/84
بازدید و کنترل دامهای تحت بررسی
گاوداری موسی رضائی
ردیف شماره دام وضعیت عمومی خون گیری گسترش
1 301 مطلوب + +
2 302 مطلوب + +
3 303 مطلوب + +
4 305 مطلوب + +
5 306 مطلوب + +
7 308 مطلوب + +
8 309 مطلوب + +
9 310 مطلوب + +
10 311 مطلوب + +
11 312 مطلوب + +
12 313 مطلوب + +
13 314 مطلوب + +
14 315 مطلوب + +
15 316 مطلوب + +
16 318 مطلوب + +
17 319 مطلوب + +
18 320 مطلوب + +
19 323 مطلوب + +
سه رأس حذف شده یک رأس مرده است.

جدول شماره 13
گاوداری رضا زندی تاریخ بازدید 10/7/84
ردیف شماره دام وضعیت عمومی دام تهیه سرم گسترش خون
1 73 مطلوب + +
2 74 مطلوب + +
3 76 مطلوب + +
4 78 مطلوب + +
5 79 مطلوب + +
6 80 مطلوب + +
7 83 مطلوب + +
دو رأس شماره ندارند خون گیری انجام نشد.

سایر فعالیت های انجام شده
الف- جداسازی نمونه های آلوده به تیلریا آنولاتا و تهیه سویه های جدید حاد و فوق حاد جهت تداوم بررسیهای مربوط به تیلریوز: در تاریخ 15/2/84 گوساله هلندی ی اصیل بشماره 2/450 تحت عمل جراحی قرار گرفت و طحال آن برداشته شد(Splenectomy )، گوساله مزبور مدت یکماه تحت کنترل قرار داده شد و در طی این مدت هفته ای سه بار از رگهای سطحی و عمیقی و غده پیش کتفی دام مزبور نمونه خون و نمونه غده برداشت و پس از تهیه گسترش بررسی ریزبینی انجام گردید ضمناً از طحال برداشته شده نیز گسترش لازم تهیه گردید و بررسی های انجام شده نشان دادند که گوساله انتخاب شده به تیلریوز و سایر تک یاخته های خونی آلوده نبوده است سپس واکسنهای لازم به دام مزبور تزریق شد و برای بررسی های بعدی آماده گردید.
در تاریخ 15/3/84 ، 40 میلی لیتر خون آلوده به تیلریور دادخل رگی به گوساله شماره 450/2 و تزریق گردید.( لازم به یادآوری است که خون آلوده توسط دکتر بهمن جاوید لامعی از منطقه بوئین زهرا ارسال شده بود.)
گوساله شماره 1450وپس از تزریق خون آلوده تحت بررسی قرار گرفت و واکنش های حرارتی دام در کمون و در مرحله بحران به شرح زیر می باشد...